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鸡胚的接种技术

更新时间:2019-05-10   点击次数:104次

  鸡胚接种技术用途广泛,除了可以分离培养病毒、支原体及衣原体等病原以确诊传染病外,还可用于病毒的鉴定,效价测定,致病力测定及制造疫苗、抗原等。因此掌握鸡胚接种技术对进行传染病的研究和防制工作非常重要。

  1选胚

  根据需要选用合适日龄的鸡胚,大多数病毒适于9~12日龄的鸡胚。鸡胚应以白色蛋壳者为好,便于照蛋观察。鸡胚应发育正常,健康活泼,不要过大、过小或畸形蛋孵化的胚。鸡胚应来自健康无病的鸡群,而且不能含有可抑制所接种病毒的母源抗体,最好选用SPF鸡胚或非免疫鸡胚。

  2. 照蛋定位

  接种前应在照蛋器下检查鸡胚,挑出死胚和弱胚。对所有健康胚应先用红铅笔画出气室位置,再于胚胎侧画出接种位点(进针点),接种点应避开大血管,靠近气室边缘处,离胚头约1cm左右。

  3 接种

  照蛋定位完毕后,即可开始接种。先用碘酊将接种位点和气室消毒,再用70%酒精脱碘,然后根据需要用三棱针或20号针头在蛋壳上打孔。

  尿囊腔接种:最常用的接种方法,鸡新城疫、减蛋综合症病毒、传染性支气管炎病毒、法氏囊病毒等均可采用这种方法。蛋壳消毒后,先在气室上打一小孔,再于胚胎一侧近气室处所画位点打一小孔,用带5~7号针头的注射器插入孔内约1. 5cm,接种接种材料0. 1~0.2mL。进针时针头与蛋壳应保持30℃角,不应垂直进针,注射完毕,立即用溶化的热石蜡将注射口和气室上小孔密封,然后放回37℃孵化箱孵化72~120h。

  绒毛尿囊膜接种:主要用于痘病毒、喉气管炎病毒和马立克氏病毒等的分离培养。将卵壳消毒后,先在气室上打一小孔,再于胚胎侧靠近气室处避开大血管用电烙铁或钢锯条将蛋壳打开1个4mm见方的小口,用刀尖小心撬开蛋壳,不能损伤卵壳膜,形成卵窗。用针尖轻轻挑破卵窗中心的卵壳膜,但不能损伤卵壳膜下的绒毛尿囊膜。在针尖挑破处滴1滴灭菌生理盐水或甘油,然后用吸头在气室小孔上吸气,使胚内造成负压,这时卵窗处绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室,此时可见生理盐水或甘油迅速渗入。用注射器滴加2~3滴接种物于卵窗的绒毛尿囊膜上,以透明胶纸封住卵窗。气室小孔用石腊密封,接种后的鸡胚平放在孵化箱中,卵窗向上,不要转运。

  卵黄囊接种:适用于马立克氏病毒、披膜病毒、衣原体及立克次氏体的分离、培养。接种方法:气室端蛋壳消毒后,在气室中央打一小孔,用7号针头注射器垂直刺入约3cm,注射接种物约0.1~0.2mL。石蜡封口,继续在37℃孵化,每天翻蛋2次。

  4 孵化和观察

  接种后继续在37℃孵化,每天照蛋2次,死胚随时取出。一般24h内死亡的胚多因创伤或细菌污染所致,故弃去不用。24h以后死亡的胚,取出后放4℃冰箱,并作上记号。接种后的孵化时间长短随病毒种类不同而不同,一般新城疫病毒、支气管炎病毒、减蛋综合征病毒和法氏囊病毒要孵化48~120h,喉气管炎病毒、马立克氏病毒要孵化48~96h,痘病毒要孵化4~5天,脑脊髓炎病毒要孵化至小鸡出壳。

  5 收毒

  接种鸡胚孵化到规定时间后,应从孵化器中取出放4℃环境冷冻36h左右,或在-10℃以下速冻4h左右,但不得使鸡胚冻结,否则易发生溶血。冷冻完毕按下列步骤收毒。

  鸡胚放于蛋盘或蛋架上,气室向上,用碘酊、酒精消毒后,以无菌镊子敲开气室蛋壳或去掉人工卵窗的透明胶纸,暴露卵膜。注意不要让卵壳碎屑掉人鸡胚内。尿囊液:气室打开后,用无菌眼科镊子慢慢撕去卵壳膜,然后夹住绒毛尿囊膜轻轻提起,用巴氏吸管刺破绒毛尿膜直接吸取尿囊液。为防止羊膜堵住吸管口,可用镊子轻轻压下羊膜及胎膜,然后再吸。每个鸡胚一般可收8ml左右尿囊液。羊水:吸完尿囊液后,可用镊子夹住羊膜,将巴氏吸管直接插入羊膜腔吸取羊水,然后再用镊子提起羊膜或压住胎儿,直至羊水收获干净。相当一部分病毒羊水和尿囊液可以混合。有些有能混合,则应将两者单收、单放。绒毛尿囊膜:如要收获整个尿囊膜,则可在消毒、打开蛋壳、撕去壳膜后,将整个卵内容物倒出,这时绒毛尿囊膜贴在卵壳内壁上,用镊子夹住将其撕脱下来即可。胚胎:消毒、打开气室卵壳后,用镊子撕破卵壳膜和绒毛尿囊膜,夹起胚胎,用剪刀剪断卵黄带,将胎儿放灭菌容器内即可。